Determinación de la Fragilidad Osmótica: Protocolo Detallado
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Método:
- Preparar soluciones seriadas en tubos de prueba y numerarlos del 1 al 18, según la tabla adjunta, haciendo las diluciones con agua destilada según lo indicado:
| N° | Tubos | Sol. Salina 1 % (ml) | Agua destilada (ml) | % ClNa |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 1.0 | 9.0 | 0.10 | |
| 2 | 2.0 | 8.0 | 0.20 | |
| 3 | 2.5 | 7.5 | 0.25 | |
| 4 | 3.0 | 7.0 | 0.30 | |
| 5 | 3.5 | 6.5 | 0.35 | |
| 6 | 3.75 | 6.25 | 0.375 | |
| 7 | 4.0 | 6.0 | 0.40 | |
| 8 | 4.25 | 5.75 | 0.425 | |
| 9 | 4.5 | 5.5 | 0.45 | |
| 10 | 4.75 | 5.25 | 0.475 | |
| 11 | 5.0 | 5.0 | 0.50 | |
| 12 | 5.5 | 4.5 | 0.55 | |
| 13 | 6.0 | 4.0 | 0.60 | |
| 14 | 6.5 | 3.5 | 0.65 | |
| 15 | 7.0 | 3.0 | 0.70 | |
| 16 | 7.5 | 2.5 | 0.75 | |
| 17 | 8.0 | 2.0 | 0.80 | |
| 18 | 8.5 | 1.5 | 0.85 |
Tubo 19: Solo tiene agua destilada: 10 ml y 0.1 ml de sangre venosa.
En seguida, aparte, preparar un tubo para Estándar de 100 % de Hemólisis del siguiente modo:
Colocar en un tubo de prueba 10 ml de agua destilada y luego añadirle 0.1 ml de sangre total obtenida con el anticoagulante. Rotular este tubo: Estándar 100 %
- Mezclar bien, por inversión y luego añadir 0.1 ml de sangre total a cada uno de los tubos.
- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversión.
- Dejar en reposo 30 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar por inversión.
- Centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos.
- Leer en el Espectrofotómetro, en 540 nm de L. Onda.
- Colocar el espectrofotómetro en 100 % Transmisión (0.00 Absorbancia), con la solución salina.
- Leer la Absorbancia de cada uno de los 18 tubos y también la absorbancia del tubo rotulado Estándar 100% de Hemólisis.
Cálculos:
% de Hemólisis = Absorbancia de cada tubo X 100
Absorbancia del Estándar
Ejemplo: absorbancia del Estándar 0.5
Absorbancia de cualquier tubo 0.3
0.3 / 0.5 X 100 = 60 % de Hemólisis.
Rangos de Fragilidades Osmóticas inmediatas a Temp. Amb. expresadas en % de Hemólisis:
| % Sol. Salina | % Hemólisis |
|---|---|
| 0.30 | 97 - 100 |
| 0.35 | 90 - 97 |
| 0.40 | 50 - 95 |
| 0.45 | 5 - 45 |
| 0.50 | 0 - 6 |
| 0.55 | 0 |
Material
- 17 vasos de precipitados (Beakers)
- Agua destilada
- Solución de NaCl 7.5%
- Solución de dextrosa al 15 %
- Balanza
- Urinómetro
- Tubos de ensayo
- Pipetas de Pasteur
- Goteros
- Pinzas mosquito