Técnica de Tinción Ziehl-Neelsen: Procedimiento y Lectura

Empiece a contar 10 minutos, retire el mechero y cuando los vapores desaparezcan caliente nuevamente, haga esto cuantas veces sea necesario hasta completar el tiempo.

• Evite que el colorante se hierva o se seque, si esto pasa agregue más colorante y continúe produciendo los vapores.
• Deje enfriar y lave suavemente con agua del chorro.

B. Decoloración Alcohol Ácido (Incoloro)

• Cubra el extendido con alcohol-ácido (líquido incoloro) durante 1 minuto.
• Lave suavemente con agua del chorro.
• Si el extendido conserva el color rojo o rosado, vuelva a agregar alcohol-ácido por 1 minuto como lo hizo anteriormente y lave nuevamente.

C. Coloración con Azul de Metileno (Azul)

• Cubra el extendido decolorado con azul de metileno durante 2 minutos.
• Lave suavemente con agua del chorro.
• Limpie con papel suave la parte de atrás de la lámina, es decir, donde no está el extendido, para retirar los residuos de colorante que pueden interferir con la lectura.
• Deje secar a temperatura ambiente protegidos de la luz directa del sol.
• Una vez secos los extendidos coloreados, revise la numeración.

6. Observación del Extendido en el Microscopio

Con la técnica de coloración de ZN, los microbios ácido-alcohol resistentes, como el bacilo de la tuberculosis, se observan teñidos de rojo en un fondo azul, a través del microscopio.

Microscopio

El microscopio es un equipo con lentes que aumentan el tamaño de los microbios, que no se observan a simple vista. Posee una lámpara como fuente de luz, o un espejo que se puede utilizar con la luz del día colocando el microscopio frente a una ventana.

El microscopio se usa para observar y contar los microbios, debe ser tratado con mucho cuidado. Revíselo y límpielo antes y después de usarlo, para que siempre funcione bien.

Los oculares, objetivos y el condensador deben limpiarse cuidadosamente con un papel suave antes y después de usarlo, especialmente el objetivo de inmersión, que por ningún motivo debe quedar sucio, porque el aceite se seca y ocasiona daño.

Guarde el microscopio donde no haya humedad ni polvo para evitar que se dañe.

El microscopio no se debe desarmar. Nunca quite ninguna de las partes porque se puede dañar definitivamente. Este trabajo debe ser realizado por personal especializado con la finalidad de garantizar el correcto funcionamiento del equipo.

7. Lectura de las Láminas en el Microscopio

• Deje caer una gota de aceite de inmersión sobre el extendido, evite que la punta del gotero toque la lámina.
• Coloque la lámina en la platina del microscopio, observe a través del ocular con el objetivo 10X enfocando con el tornillo macrométrico hasta observar un fondo azul, luego cambie al objetivo de inmersión 100X y enfoque con el tornillo micrométrico. Los microbios se van a ver teñidos de color rojo intenso sobre un fondo azul.

Método de Lectura

Lea inicialmente los controles. Realice la búsqueda de microbios o bacilos ácido-alcohol resistentes recorriendo toda la lámina y usando el tornillo micrométrico.

Para informar el resultado de la lectura se debe tener en cuenta la cantidad de microbios ácido alcohol resistentes que se encontraron con el objetivo de inmersión.

Cuando termine de observar al microscopio, limpie cuidadosamente con papel suave el aceite de inmersión de cada una de las láminas, sin dañar los extendidos. Guárdelas protegidas de la luz y el polvo para enviarlas al Laboratorio de Salud Pública, con el fin de realizar el Control de Calidad que evalúa el extendido, la coloración y la lectura.

Informe de Resultados para Escala Semicuantitativa

(-) No se observan bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes, en 100 campos microscópicos observados ó en diez minutos de observación.

(+) Menos de un bacilo o microbio ácido-alcohol resistente por campo, en 100 campos microscópicos observados.

(++) Uno a diez bacilos o microbios ácido-alcohol resistente por campo, en 50 campos microscópicos observados.

(+++) Se observan más de 10 bacilos o microbios ácido-alcohol resistente por campo, en 20 campos microscópicos observados.

Ejemplos

Ejemplo 1: Baciloscopia en la cual no se observan bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes en 100 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (-)

Ejemplo 2: Baciloscopia en la cual se observa menos de un bacilo o microbio (muy pocos) ácido-alcohol resistente por campo, en 100 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (+)

Ejemplo 3: Baciloscopia en la cual se observan (varios) de uno a diez bacilos o microbios ácido-alcohol resistentes por campo, en 50 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (+ +)

Ejemplo 4: Baciloscopia en la cual se observan más de diez bacilos o microbios (muchos) ácido-alcohol resistentes por campo, en 20 campos microscópicos. El resultado de esta baciloscopia es (+ + +)

Escriba el resultado de la lectura de la baciloscopia correspondiente a cada persona en el libro de registro diario de baciloscopia y cultivo y en la hoja de informe de resultados.