Técnicas de Separación: Fundamentos y Aplicaciones en el Laboratorio

Separación de Componentes en Mezclas: Técnicas y Aplicaciones

Obtener todos o algunos de los componentes de una mezcla.

Aplicaciones de las Técnicas de Separación

• Purificar: Separar las impurezas que contiene una mezcla.
• Obtener: Alguna de las sustancias presentes en la muestra para su estudio o utilización.
• Identificar: La presencia de una sustancia en la muestra.
• Cuantificar: La concentración de una sustancia en la muestra.

Según la propiedad en que se basen, las técnicas pueden ser:

• Física: Densidad, tamaño de partícula, forma de partículas. (Filtración, decantación y centrifugación)
• Electroquímica: Electroforesis
• Solubilidad:

Otros Criterios para Clasificar las Técnicas

• Cantidad de muestra: Purificación (mucho), Electroforesis (alícuota)
• Fase analítica: Pre-analítica (Centrifugación sangre), Analítica (Detección de sustancias)

Separación a partir de Propiedades Electroquímicas: Electroforesis

Técnicas de separación de mezclas para su caracterización que se basan en la diferencia de movilidad en un campo eléctrico de las moléculas que las forman.

• Se basa en disponer la mezcla en un soporte y aplicar un campo eléctrico.
• Todas las partículas deben tener la misma carga para que se muevan hacia el mismo polo del campo eléctrico.

Equipo Básico de Electroforesis

• Fuente de alimentación: Aporta la diferencia de potencial para que migren los componentes de la mezcla.
• Cubeta: Consta de 2 recipientes en los que se deposita una solución tampón; éste impide que durante la prueba se acidifique el ánodo y el cátodo se haga más básico. Los recipientes llevan conectados los electrodos. Se prefieren las cubetas de pequeño tamaño porque:
  • Tienen menor superficie de evaporación.
  • Se minimizan las diferencias de temperatura entre recipientes.
  • Permite reducir el tamaño de las aplicaciones.
• Un puente sobre el que se coloca el soporte.
• Soporte: Matriz donde se deposita la muestra.
  • Sus extremos deben estar en contacto con la solución tampón de los recipientes de la cubeta, sobre el puente.
  • Inerte (sin carga) para que no interfiera con la migración.
  • Preparación adecuada, siguiendo instrucciones y respetando el grosor.

Tipos de Soporte

• No restrictivos: La separación se hace en función de la carga eléctrica porque tienen gran tamaño de poro. Acetato de celulosa (separar proteínas plasmáticas), papel (desuso)
• Restrictivos: La separación depende de la carga pero también del tamaño de la molécula porque los poros actúan como tamiz.