Técnicas de Tinción y Bandeo Cromosómico y Cariotipo Humano

Tinción y Bandeo Cromosómico

Las técnicas de tinción y bandeo cromosómico permiten identificar los cromosomas y detectar anomalías.

Tinción

Se utilizan tinciones como Giemsa u orceína que tiñen de manera uniforme. Sin embargo, con estas tinciones no se pueden identificar individualmente los cromosomas ni detectar anomalías estructurales.

Bandeo

Las técnicas de bandeo tiñen los cromosomas de forma discontinua, definiendo bandas transversales y generando patrones de bandeo específicos de cada cromosoma. Algunos tipos de bandeo son:

1. Bandeo G: Se tratan preparaciones envejecidas con tripsina y se tiñen con Giemsa. Las bandas oscuras (G+) son ricas en AT y las bandas claras (G-) son ricas en GC.
2. Bandeo R: Es el negativo del bandeo G. Se tratan los cromosomas con calor a 85º en tampón y se tiñen con Giemsa.
3. Bandeo Q: Es una técnica fluorescente que utiliza quinacrina. Las bandas brillantes corresponden a las bandas G+.
4. Bandeo C: Tiñe regiones ricas en heterocromatina, como los centrómeros, regiones pericentroméricas del brazo q y la región distal del brazo q del cromosoma Y.
5. Bandeo T: Tinción diferencial de los telómeros. Con tiempos de incubación más largos, las bandas oscuras son ricas en GC y genes de replicación temprana.

Idiograma y Nomenclatura de Bandas

El idiograma es una representación gráfica simplificada de un cromosoma teñido con una técnica de bandeo. Para construir un idiograma se siguen los siguientes pasos:

1. Alineamiento de los cromosomas por el centrómero.
2. Determinación de la relación entre los brazos p y q.
3. Numeración de las regiones dentro de cada brazo, desde la más próxima al centrómero hasta la más alejada.
4. Utilización de la nomenclatura citogenética (cromosoma, brazo, región, banda) para identificar cada banda.
5. El final de las regiones se marca a la mitad de la primera banda de la región más alejada del centrómero.

Cariotipo

El cariotipo es el conjunto de cromosomas de una especie, un individuo o una célula, ordenados de acuerdo a su tamaño y morfología.

Tipos de Cariotipo

• Cariotipo de especie: Constituido por el conjunto normal de cromosomas que caracteriza a una especie determinada. Sirve como patrón para comparar.
• Cariotipo de individuo o constitucional: Conjunto de cromosomas representativos del individuo.
• Cariotipo de célula: Conjunto de cromosomas que contiene una célula.

Cariotipo Estándar de Sangre Periférica

Se utiliza para obtener el cariotipo del individuo. Consta de 4 fases:

1. Cultivo de linfocitos: Se necesita una muestra de sangre con heparina, medio de cultivo y un frasco Roux o tubo para cultivo. El procedimiento incluye la siembra de la muestra, la adición de fitohemaglutinina, la incubación en gradillas inclinadas a 45º y la detención de la mitosis en metafase con colchicina (que destruye los microtúbulos).
2. Obtención de extensiones de metafase: Se centrifuga el cultivo, se realiza un choque hipotónico e incubación, se fija y lava con Carnoy y se obtienen extensiones por goteo a 30 cm.
3. Tinción y bandeo: Se puede realizar una tinción con Giemsa (uniforme) para controlar la calidad de las metafases o un bandeo G (preparaciones envejecidas con digestión con tripsina y tinción con Giemsa).

Los cromosomas se ordenan según su tamaño, la posición del centrómero y la presencia de constricciones secundarias. En el cariotipo humano se distinguen 8 grupos (A-G) para los cromosomas somáticos y 2 para los cromosomas sexuales (X e Y).

Fórmula Cromosómica

La fórmula cromosómica proporciona información detallada del cariotipo de un individuo. Algunos ejemplos son:

• Síndrome de Turner: 45,X
• Síndrome del duplo Y: 47,XYY
• Síndrome de Klinefelter: 47,XXY
• Síndrome de Down: 47,XX,+21
• Síndrome de Edwards: 47,XX,+18
• Síndrome de Patau: 47,XX,+13

Cariotipo de Alta Resolución

Se realiza en profase tardía, cuando los cromosomas están menos condensados y se pueden observar más bandas. Para realizarlo, hay que sincronizar el cultivo de linfocitos añadiendo metotrexato.