Sistema del Complement: Funcions, Alteracions i Avaluació

El Complement com a Reactiu, Paràmetre i Interferència Analítica

Utilitzem el Sistema del Complement (SC) com a reactiu ja que l'utilitzem per valorar la formació de complexos Ag-Ac. Aquestes proteïnes estaran controlades al laboratori.

El complement com a reactiu

Fixació del complement

1. Tenim la mostra del pacient i busquem la presència d'Ag. S'afegeix Ac específic i, si l'Ag està present, es formarà el complex Ag-Ac. Tot seguit, s'afegeixen les proteïnes del SC i, si s'han format els complexos, aquestes quedaran fixades.
2. Seguidament, s'afegeixen eritròcits marcats amb hemolisina. Quan no hi ha lisi, significa que sí que s'han format els complexos Ag-Ac i les proteïnes del SC. Com que ja estan "ocupades" amb el complex Ag-Ac, no podran trencar els eritròcits marcats.

Per saber si hi ha hagut hemòlisi, es centrifuga el tub, i si els eritròcits no s'han trencat, es veurà un precipitat. Si hi ha hagut hemòlisi, s'alliberarà Hb i el tub quedarà de color vermell.

Valoració d'immunocomplexos

Es vol saber si el pacient ja té immunocomplexos. Tenint al laboratori la proteïna C1q (s'uneix a immunocomplexos) marcada, aquesta s'unirà amb els immunocomplexos d'una persona. Per saber quants n'hi ha, s'utilitzarà un citòmetre de flux.

Dye Test (prova de la mort cel·lular)

Tenim la mostra del pacient on busquem Ag o Ac, i s'afegeix l'Ag unit a una cèl·lula o bacteri. Si hi ha Ac, s'unirà a la cèl·lula afegida i, si es formen els immunocomplexos, s'afegeixen les proteïnes del SC, que s'uniran i trencaran la cèl·lula. S'afegeix colorant: si tenyeix, vol dir que no s'ha trencat la cèl·lula; si no tenyeix, sí que hi ha hagut lisi cel·lular.

Positiva: no hi ha tinció. Negativa: hi ha tinció.

El complement com a paràmetre

Es poden fer valoracions qualitatives (quan volem saber si funciona o no el SC) i quantitatives (concentració de cada proteïna del SC de la persona).

Qualitativa

S'agafa la mostra del pacient esperant que hi hagi les proteïnes del SC i s'afegeixen eritròcits + hemolisines. Si el SC és funcional, provocarà la lisi d'aquests eritròcits i, per tant, aquest SC funcionarà. Si no funciona, vol dir que el SC no és actiu, però no sabem on està el problema.

Quantitativa

Podem valorar qualsevol proteïna del SC i la tractarem com si fos un Ag. Tindrem Ac contra totes les proteïnes del SC. Es marcaran les proteïnes per separat.

El complement com a interferència analítica

Si el SC que mostra el pacient és una "molèstia" quan funciona, podem descomplementar el sèrum escalfant-lo a 55 graus durant 30 minuts. Així, s'inhibirà el SC i les proteïnes poden quedar desnaturalitzades.

Condicions d'extracció o processament de les mostres

Sempre és millor utilitzar una mostra de sèrum i no de plasma per valorar les proteïnes del SC, ja que el plasma té anticoagulant. Alguns anticoagulants s'uneixen als ions de calci i magnesi de les proteïnes, fent que no sigui tan eficaç. Quan tenim la mostra de sèrum, immediatament se separa el coàgul. Es pot tenir a temperatura ambient més de 6 hores (si són 3 hores, millor). Si no es poden fer les proves necessàries, es refrigera a 4 graus durant 24 hores (si és una prova quantitativa, no es pot congelar) i a -70 graus (si és qualitativa). Quan congelem proteïnes, en fer la prova no és recomanable descongelar-les i tornar-les a congelar, per evitar que es produeixin les alíquotes (dividir la mostra en diferents tubs). Es poden fer dilucions, que sempre seran amb sèrum salí a 4 graus. Per fer una analítica, hi ha patrons i controls que s'han de resuspendre amb aigua destil·lada a 4 graus. Quan es fan patrons i controls, també es fan alíquotes.

Paràmetres del laboratori en l'estudi del Complement: Significació

Hi ha diferents tècniques:

1. Assaig CH100/ CH50

Es mesura la funcionalitat global del SC utilitzant eritròcits sensibilitzats o amb hemolisines.

2. Assajos d'activitat per a cadascun dels complements del SC

Tenim la mostra del pacient i, per exemple, vull mirar la funcionalitat del C3. S'afegeix un excés de la resta de proteïnes del SC (menys la que jo busco). Després, s'afegeixen eritròcits marcats; si C3 funciona, hi haurà lisi.

Tècniques

CH50

Es valora quants ml del sèrum del pacient causen una hemòlisi del 50% d'eritròcits sensibilitzats.

1. S'agafa una mostra de sèrum del pacient i es fa un banc de dilucions.
2. A cada tub, afegeixo la mateixa quantitat d'eritròcits sensibilitzats (amb Ac a la superfície).
3. Es busca quin tub té el 50% d'hemòlisi i aquest dirà les unitats CH50, que són els ml de sèrum del pacient suficients per provocar el 50% d'hemòlisi.

En saber les unitats CH50 de la persona, podrem calcular el títol hemolític, és a dir, les unitats CH50 que hi ha en 1 ml del pacient. Cada laboratori té un rang normal propi, ja que cada laboratori té un protocol diferent. És un assaig global del SC; si falla, no ens mostra quina és la proteïna que no funciona.

CH100

Es fa per immunodifusió radial, on tenim una placa de Petri plena d'eritròcits marcats amb hemolisines. Al centre, hi ha un "pou" on es posa el sèrum. Conforme les proteïnes es van expandint per la placa, els eritròcits aniran hemolitzant. Si funciona molt bé el SC, l'expansió serà més gran i, en cas contrari, més petita. Es mesura el diàmetre de l'anell que ha provocat el sèrum; cada laboratori té una recta patró i observem l'activitat global i la via clàssica.

C3 i C4

S'observen proteïnes concretes, ja que són les que normalment fallen. Quan volem mesurar C3, també ho farem amb la via clàssica i alternativa. Quan valorem C4, només ho fem per la via clàssica.

Tècniques de valoració

• Nefelometria: utilitzar Ac contra C3 o C4 i mesurar l'angle de dispersió d'un feix de llum que incideix en un complex Ag-Ac. Mentre més quantitat de complexos, més gran serà l'angle de dispersió i anomenarem la concentració C3/C4.

Altres factors

Aquests assajos no es fan de forma habitual, com la properdina (també es fan amb el nefelòmetre).

C1 inhibidor

La seva funció és unir-se a C1r i C1s per evitar l'activació del SC de la via clàssica.

Per saber la concentració de C1 inhibidor

1. Sèrum del pacient (s'afegeixen eritròcits marcats amb hemolisines per activar la via clàssica).
2. Complement activat.

Quan s'activa la via clàssica, l'inhibidor C1 inhibidor s'uneix a C1. Per tant, en fer la segona mesura, es veu menys quantitat de C1r; això és normal. Si la persona té algun problema, la concentració no variarà gaire.

Edema angioneuròtic hereditari

És una malaltia on la via clàssica es pot hiperactivar perquè no està regulada i hi haurà molta quantitat de C2b.

C2 quinina

És un vasodilatador molt potent, augmenta la permeabilitat dels vasos sanguinis i provoca edemes (falta a nivell pulmonar).

Interpretació

Es busquen les causes de qualsevol alteració.

Causes que provoquen

1. Disminució de l'activitat del SC

CH50/CH100 baixa per mutacions. Per tant, hi haurà proteïnes anòmales. Infecció: es consumeixen les proteïnes del SC. Increment del catabolisme, ja que es fabriquen altres tipus de proteïnes en tumors. Excés d'inhibidors.

2. Increment de l'activitat del SC

Quan hi ha hiperproducció de les seves proteïnes, com quan es passa una infecció.